POLİMERAZ ZİNCİR REAKSİYONU (PCR) YÖNTEMİ VE REAL-TIME PCR
Techno Prime (PCR)
Roche Lightcycler (REAL-TIME PCR)
PCR Metodu basitçe, nükleik asitlerin uygun koşullarda tüpte çoğaltılması şeklinde tanımlanmaktadır. Spesifik bir DNA parçasının kopyalarının primerler tarafından önlendirilerek enzimatik olarak sentezlenmesi şeklinde tanımlanan in vitro (canlı dışında, tüpte) bir yöntemdir. Yöntemin temeli, çoğaltılmak istenen bölgenin iki ucuna özgü, bu bölgedeki baz dizilerini tamamlayıcı bir çift sentetik oligonükleotid primer kullanılarak, bu iki primerlerle sınırlandırılan genin enzimatik olarak sentezlenmesine dayanır. PCR tekniği, çok az miktarda DNA ile çalışmaya olanak sağlamaktadır. PCR tekniği ile laboratuvar tanısında çok büyük bir hız ve kesinlik kazanılmış; birçok durumda radyoaktivite kullanımını gereksiz hale getirmiştir.
Real-Time PCR’da ürünlerin analizi reaksiyon sırasında yapılmaktadır. Bu nedenle, agaroz jel elektroforezi, DNA bantlarının mor ötesi ışık altında görüntülenmesi gibi işlemlerin uygulanmasına gerek kalmamaktadır. Real-Time PCR ürünlerinin kalitatif ve kantitatif analizlerinde, diziye özgün olmayan floresan boyalardan ya da diziye özgün problardan yararlanılmaktadır. Real-Time PCR Reaksiyon esnasında her bir PCR siklusunda yeterli miktarda ürünün verdiği floresans ışığa göre çalışıp reaksiyonu aşama aşama sonuna kadar oluşan ürünü kontrol eden bir sistemdir.
PCR’ın Kullanım Alanları;
- Kalıtsal hastalıklarda taşıyıcının ve hastanın tanısı,
- Prenatal tanıda;
- Klinik örneklerde patojen organizmaların saptanmasında,
- Adli tıpta,
- Onkogenesisin araştırılmasında,
- Klonlamada, gen tanısı araştırmalarında,
- Nokta mutasyonlarının belirlenmesinde,
- DNA dizi analizinde, büyük miktarda DNA örneklerinin oluşturulmasında,
- Bilinmeyen dizi tayinlerinde,
- İn vitro fertilization yapılan tek hücrede, implanasyon öncesi genetik testlerin yapılmasında,
- DNA-Protein interaksiyonunun araştırılmasında vb. kullanılmaktadır.
